Ю Корзюков - Болезни аквариумных рыб

Крупных паразитов (рачков, гельминтов) подсчитывают в абсолютных числах, а мелких (споровиков, инфузорий и других простейших) — в относительных, то есть подсчитывают число паразитов в десяти полях зрения микроскопа и определяют средние показатели. При этом высчитывают по каждому паразиту в отдельности экстенсивность и интенсивность инвазии для каждого вида и возраста рыб.

В случае затруднения видового определения тех или иных паразитов их необходимо консервировать в соответствующих жидкостях и сохранять для дальнейшей камеральной обработки. На склянку обязательно наклеивают этикетку.

Жабры. Все жаберные дуги вынимают, помещают на предметное стекло, собирают всех видимых паразитов, их подсчитывают и фиксируют.

Соскоб с жаберных лепестков или целые жаберные дуги с несколькими каплями воды зажимают между двумя предметными стеклами так, чтобы они стали прозрачными, и исследуют при малом увеличении микроскопа.

Споровики, некоторые инфузории и личинки сосальщиков могут находиться не на поверхности жаберных лепестков, а в, особых соединительнотканных образованиях (бугорках); обнаружить и извлечь их можно только после разрыва стенки бугорка при помощи препаровальных игл. В кровеносных сосудах жабр могут находиться яйца сангвиникол, споры и мицелии гриба.

Глаза. Для обнаружения паразитов глаза извлекают из глазных впадин, помещают на предметное стекло и вскрывают острыми ножницами с внутренней каудальной стороны. Извлеченное стекловидное тело, хрусталик и содержимое передней камеры глаза компрессируют между двумя предметными стеклами и просматривают при малом увеличении микроскопа. В глазах можно обнаружить личинки сосальщиков рода Diplostomulum.

Кровь. Каплю крови наносят на обезжиренное предметное стекло, вносят для предотвращения свертывания немного 1 %-ного раствора лимоннокислого натрия, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Для предотвращения высыхания крови края покровного стекла обмазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому — Гимза или гематоксилином и также исследуют под микроскопом.

Брюшная полость. Брюшную полость вскрывают по методике, изложенной в разделе «Микробиологические методы исследования», с той только разницей, что при паразитологическом исследовании нет необходимости соблюдать условия стерильности. Дугообразный разрез к основанию левого грудного плавника начинают от анального отверстия, вводя непосредственно в него тупой конец одной из бранш ножниц. Вскрытую брюшную полость осматривают, а имеющиеся на серозных покровах и брыжейке бугорки исследуют под микроскопом.

Сердце. Для исследования сердце помещают в бактериологическую чашку с физиологическим раствором, вскрывают его полости, промывают и образовавшийся осадок исследуют под микроскопом на наличие возбудителя сангвиниколеза.

Печень. Чтобы обнаружить паразитов, обитающих в печени, ее делят на небольшие кусочки, которые компрессируют и исследуют под лупой и затем при слабом увеличении микроскопа.

Желчный пузырь. Для обнаружения паразитов желчный пузырь вырезают, помещают на предметное стекло, разрезают ножницами, делают соскоб с внутренней оболочки стенки пузыря. Соскоб и сам желчный пузырь помещают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой и микроскопом. В желчном пузыре можно обнаружить простейших и сосальщиков.

Селезенка. Селезенку помещают между двумя стеклами, сжимают до прозрачности и исследуют под микроскопом.

Почки. Для обнаружения паразитов почки компрессируют и исследуют под микроскопом. В почках можно найти споровиков и яйца сосальщиков.

Плавательный пузырь. В случае необходимости соскоб с внутренней оболочки плавательного пузыря можно исследовать под микроскопом компрессорным методом.

Мочевой пузырь. Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре можно обнаружить сосальщиков, споровиков и инфузорий.

Половые органы. Для обнаружения паразитов железу по частям компрессируют между стеклами и просматривают под микроскопом.

В половых органах встречаются микроспоридии.

Желудочно-кишечный тракт. Пищевод, желудок и кишечник извлекают, освобождают от жира и печени, расправляют и вскрывают ножницами, начиная с пищевода. По ходу вскрытия обнаруженных крупных паразитов (ленточных и круглых червей, сосальщиков) извлекают и помещают в физиологический раствор. Содержимое из различных отделов желудочно-кишечного тракта исследуют компрессорным методом под микроскопом. Затем с помощью скальпеля делают глубокий соскоб со слизистой оболочки из нескольких мест и исследуют на наличие микроскопических паразитов (октомитус).

Мышцы. Чтобы обнаружить мелких паразитов, берут небольшие кусочки мышц из различных частей тела и исследуют компрессорным методом под лупой и под микроскопом при малом увеличении. В мышцах можно обнаружить споровика плистофору и его споры.

Головной и спинной мозг исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков.

Методы окраски. Мазки крови па наличие кровепаразитов окрашивают азур-эозином по Романовскому — Гимза (0,8 г азура II, 3 г эозина, 250 мл химически чистого глицерина и 250 мл метилового спирта) или метиленовой синью по Машковскому (1 г метиленовой сини и 2,5 г буры растворяют в 100 мл горячей воды).

Готовую, имеющуюся в продаже краску Романовского перед окрашиванием разводят из расчета 2–3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Если готовая краска отсутствует, ее можно приготовить самим. Для этой цели 1 г азура II растворяют в 1 л прокипяченной дистиллированной воды (раствор № 1) и 1 г эозина — в 1 л воды (раствор № 2). Оба раствора хранят отдельно. Перед употреблением на 1 мл нейтральной дистиллированной воды прибавляют по две капли каждого раствора. Продолжительность окраски 20–40 минут. Эритроциты окрашиваются в красный или розовый цвет, протоплазма паразитов и лейкоцитов — в синий, ядра паразитов — в красный, а лейкоцитов — в фиолетовый.

Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки в течение 30 секунд, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5—10 %-ным водным раствором танина. Эритроциты получаются красновато-фиолетовые, протоплазма простейших кровепаразитов — ярко-голубая, ядра лейкоцитов — фиолетовые.

Для изучения морфологии паразитических инфузорий применяют окраску железным гематоксилином по Гейденгайну (протрава 2–2,5 %-ным раствором сернокислых железо-аммиачных квасцов — 1–2 часа, окраска их 1 %-ным спиртовым раствором гематоксилина в течение нескольких часов и дифференциация 1 %-ным раствором 5—10 минут). Окрашивать инфузории можно также гематоксилином Делафильда или квасцовым кармином.