Леонид Прохоров - Возможно ли преодолеть старение? Сегодня и завтра клеточной терапии

Полученные от пациентов культуры клеток используют для наработки необходимого количества клеток, достаточного для процедур (6—8 пассажей или делений клеток в культуре). Далее фибробласты тестируются на отсутствие контаминации (заражения) ВИЧ, гепатитов А, В и С, микоплазмы и хламидий. Тестирование проводится при помощи ПЦР (полимеразная цепная реакция) и иммуноферментными методами. Отсутствие онкогенных потенций клеток определяют на бестимусных (без иммунитета) мышах. Далее монослойные культуры клеток снимают с поверхности флаконов смесью растворов Версена и трипсина и суспендируют (перемешивают) с применением серологических пипеток в стерильном физиологическом растворе для инъекций. Затем 2—3 раза центрифугируют и отмывают клетки от Версена и трипсина в таком же физрастворе. Готовые суспензии сохраняют при +4 0С. Препараты клеток используют в течение 24 часов после получения суспензии.

Жизнеспособность клеток в суспензии определяют с помощью высевания суспензионной культуры через различные сроки инкубации и подсчета количества прикрепившихся клеток, по их способности к образованию колоний.

Процедуру введения клеток пациенту проводят методом туннельных инъекций для крупных морщин или обкалыванием мелких морщин. Количество клеток в препаратах варьирует в зависимости от процедуры, объем введенного препарата составляет в среднем 1—3 мл на процедуру. Количество вводимых клеток составляет в среднем от 1 до 10 млн.

Метод введения клеток показан на рис. 9а и 9б. Клетки вводятся с помощью инсулинового шприца в дермальный (средний) слой кожи (Згурский, 2004). Игла инсулинового шприца очень тонкая, поэтому процедура вызывает минимально неприятные ощущения.

Поверхность кожи, в которую вводятся клетки, обрабатывается стерилизующими растворами перед выполнением процедур, а все манипуляции исполнитель делает строго в стерильных резиновых перчатках и в марлевой повязке, закрывающей дыхательные органы.

По мнению одного из ведущих специалистов в области применения аутогенных фибробластов кандидата биологических наук А. А. Згурского (Згурский, 2004) процедура имеет несколько привлекательных моментов для косметолога и, соответственно, для пациента:

— используются собственные клетки пациента;

— обычно проводится однократное взятие биопсии;

— имеется небольшой дискомфорт в процессе применения процедур для пациента;

— эффект сохраняется длительное время;

— простота применения;

— проводится небольшое число процедур, необходимое для получения эффекта;

— отсутствуют осложнения и побочные эффекты.

Аутогенные фибробласты применяют для коррекции морщин, атрофических рубцов, атрофических участков кожи, нарушений структуры кожи (Boss et. al., 2000).

В результате применения:

– замедляется старение кожи;

– улучшается цвет кожного покрова;

– разглаживаются глубокие и исчезают мелкие морщины;

– повышается упругость и эластичность соединительной ткани кожи;

– имеется значительный эффект при коррекции рубцов и носогубных складок через 7 и 12 мес.

В первые часы после введения клеток наблюдаются местные эффекты в виде гиперемии (местное увеличение притока крови) и небольшого отека, которые исчезают через 2—3 ч. после процедуры. Положительный эффект начинает проявляться через 6—8 ч. после процедуры, что выражается в увеличении тургора (упругости) и эластичности кожи, ее кровоснабжения. Отмечен положительный эффект, заключающийся в исчезновении мелких и уменьшении крупных морщин (Крихели и др., 2004). Улучшение кожи происходит в течение нескольких месяцев. Сохранение положительного эффекта прослеживается на протяжении 12 мес. Пример применения аутогенных фибробластов для лечения носогубных складок показан на рис. 10а и 10б. На рис. 11а и 11б приведен пример улучшения поверхности кожи около глаз: рис. 11а – область глаза до процедур, рис 11б – через несколько месяцев после применения терапии. Видно, что количество и глубина морщин после процедур заметно уменьшилось. На рис. 12а и 12б показан результат лечения лобных морщин.

Некоторые специалисты пришли к заключению, что лечение морщин с помощью аутологичных фибробластов является наименее трудоемким и наиболее эффективным методом коррекции морщин в клинической практике. Этот метод представляется единственным, эффективно убирающим рубцовые изменения после угревой сыпи (Рис. 13а и 13б). По данным доктора Арнольда Клейна (США) эффективность метода достигает 95%.

Основные свойства фибробластов сохраняются при культивировании их вне организма. Эти клетки:

– сохраняют диплоидный кариотип в течение жизни;

– имеют ограниченную продолжительность жизни;

– обладают свойством контактного торможения делений и требуют прикрепления к субстрату (дну культурального флакона) для пролиферации;