Рэм Петров - Я или не я

Неожиданно обнаружили, что тимические препараты обладают противоопухолевым эффектом, и вскрыли основной механизм их действия: обеспечение созревания Т-лимфоцитов из клеток-предшественников. Все это послужило причиной бума в научном мире вокруг гормонов тимуса. Во многих лабораториях мира развернулись работы по выделению и изучению этих активных компонентов иммунитета. И результаты не замедлили сказаться.

Совсем недавно американский иммунолог Алан Бах выделил тимусный фактор из сыворотки крови, назвал его ГТ — фактором тимуса сывороточным и полностью расшифровал аминокислотный состав молекулы, состоящей всего из 9 аминокислот.

Другой исследователь из США, Аллан Гольдштейн, выделил из тимуса препарат, названный тимозином, и применил его для лечения детей с врожденными недоразвитиями железы. Это редкие заболевания, при которых, как у бестимусных мышей, частично или полностью выключена Т-система иммунитета. Дети тяжело болеют, резко отстают в развитии и погибают от инфекционных осложнений или от той или иной формы рака. О результатах этой работы говорить, видимо, пока рано.

Во 2-м Московском медицинском институте имени Н. И. Пирогова на кафедре иммунологии совместно с Центральной научно-исследовательской лабораторией, Онкологическим центром АМН СССР и 55-й клинической больницей под общим руководством академика АМН СССР Юрия Михайловича Лопухина проводится широкий цикл исследований по изучению природы, биологического действия и клинического использования еще одной активной фракции тимуса — АФТ-6.

Этот препарат получен в лаборатории, руководимой кандидатом биологических наук Виталием Яковлевичем Арионом. АФТ-6 по своим физико-химическим свойствам выгодно отличается от других тимических препаратов, в том числе и от гольдштейновского тимозина. Прежде всего своей чистотой. Об этом говорит значительно меньший вес молекул АФТ-6, с которым связана основная активность препарата.

Основное биологическое действие препарата АФТ-6 — его способность восстанавливать Т-систему иммунитета. Это было показано в опытах на животных с удаленным тимусом. В одинаковых тестах препарат АФТ-6 активен в дозе 1 микрограмм на 3 миллиона лимфоцитов, а тимозин Гольдштейна — в дозе 9-12 микрограммов на то же количество лимфоцитов. Препарат АФТ-6 действует на предшественников Т-лимфоцитов, усиливает киллерную активность, увеличивает число Т-лимфоцитов в культуре клеток и у больных, страдающих от их недостаточности. Ему дали название Т-активин.

Препарат успешно применяли с лечебной целью при некоторых заболеваниях лимфатической системы человека, в частности при лимфогрануломатозе. Есть основания полагать, что Т-активин окажется полезным в более широком плане как эффективное средство для восстановления Т-системы иммунитета.

Тимозин, АФТ-6

До последнего времени не были известны гормоны или медиаторы, которые обеспечивают нормальное созревание Б-системы иммунитета. Неизвестен абсолютно точно и орган, где происходит становление Б-лимфоцитов у млекопитающих, хотя и предполагается, что им служит сам костный мозг. В связи с этим представляет большой интерес описанный в самые последние годы новый класс медиаторов, вырабатываемых костномозговыми клетками.

Первый медиатор этого типа обнаружен в нашей лаборатории в Институте биофизики Минздрава СССР группой сотрудников, возглавляемой доктором биологических наук Августой Алексеевной Михайловой. Первые наблюдения сделаны в 1968 году, последних нет — исследование продолжается.

Михайлова ввела мышам чужеродный белок — антиген. Через четыре дня в лимфатических узлах животных накопились плазматические клетки, вырабатывающие антитела. Клетки лимфатических узлов извлекли и поместили в питательную среду — in vitro (то есть в стекле, в стеклянном флаконе). Через 18 часов подсчитали, сколько там антителопродуцентов и какое количество антител они выработали. Получили цифры.

В соседние флаконы с питательной средой поместили те же самые клетки, но к ним добавили равные количества клеток из костного мозга нормальных неиммунизированных мышей. Взвесь клеток костного мозга не содержала антителопродуцентов, да сами по себе они и не могут вырабатывать антитела. 18 часов спустя подсчитали: количество антителопродуцентов и антител в смеси выросло втрое.

Сразу же возник вопрос: чьи это клетки — лимфатических узлов или костномозговые? Иначе говоря, то ли иммунные клетки лимфатических узлов заставляют подключиться к работе неиммунные клетки костного мозга, то ли костномозговые клетки интенсифицируют работу ранее включенной и теперь уже зрелой популяции антителопродуцентов.

Культивируемые клетки разделили мембраной, через которую они не проникают, но проходят все вырабатываемые ими растворимые компоненты. С одной стороны мембраны поместили иммунные клетки лимфатических узлов, с другой — костномозговые. Через 18 часов культивирования посмотрели и подсчитали количество антителопродуцентов. В костномозговой суспензии они не появились, а среди лимфоидной их стало втрое больше. Значит, именно костномозговые клетки вырабатывают растворимый фактор — медиатор, который обеспечивает увеличение числа зрелых антителопродуцентов в 3 раза! Это происходит уже через 6 часов, без клеточного деления. Следовательно, медиатор активизирует готовые к выработке антител, но до поры "молчащие клетки".

Следующим этапом исследования было выделение этого медиатора из питательной среды, в которой находился костный мозг. Сначала убедились, что в этой среде действительно накапливается стимулятор. Для этого к лимфоидным клеточным суспензиям добавили не костный мозг, а лишь культуральную жидкость, в которой в течение 18 часов жили костномозговые клетки. Эффект воспроизвелся.

После этого жидкость стали разделять на фракции с помощью метода колоночной хроматографии (суть его в использовании различий молекулярных весов и размеров белковых молекул). Из 40 выделенных фракций активными оказались лишь те, чей молекулярный вес находился вблизи значений 13 тысяч. Это совсем некрупная молекула, молекулы антител достигают иногда 900 тысяч.

Костномозговому стимулирующему фактору авторы дали имя САП, что значит стимулятор антителопродуцентов. Молекула САП состоит из двух компонентов — белковой и рибонуклеиновой. Один миллион помещенных в культуру костномозговых клеток вырабатывает 10 миллиграммов САПа. При введении в организм активность препарата оказалась даже более выраженной, чем для культивируемых in vitro клеток: в лимфатических узлах иммунизированной мыши накапливалось в 4-5 раз больше антителопродуцентов.