Нэлла Парамонова - Заболевания органов дыхания в детском возрасте

ИЛ – интерлейкин.

ТН 1– Т–хелперы 1–го типа.

ТН 2– Т–хелперы 2–го типа.

Выполняют следующие пробы:

■ кожные (аппликационные, скарификационные).

■ внутрикожные.

■ провокационные пробы с аллергенами.

При скарификационных пробах после предварительной обработки спиртом на кожу предплечья или спины наносят капли различных аллергенов, сквозь которые скарификатором делают насечки. Кожно–аллергическая реакция учитывается спустя 20 минут от момента введения аллергена.

В сыворотке крови определяют общий IgE и специфические IgE и IgG.

Методика проведения потовой пробы методом пилокарпинового ионофореза и определение концентрации электролитов в поте (классический метод Гиббсона–Кука, 1959).

Аппаратура, материалы и реактивы:

■ аналитические весы.

■ гальванический аппарат для постоянного тока до 50 мА.

■ 2 набора свинцовых пластинчатых электродов толщиной 0,2–0,4 мм с размером анода 6,5 x 8,5 см для детей старше 3 лет и 4,0 x 5,5 см для детей первых трех лет жизни; размер катода должен быть на 0,5 см длиннее и шире анода.

■ набор гидрофильных прокладок к электродам толщиной не менее 1 см и на 1 см длиннее и шире свинцовых электродов.

■ бинты резиновые или эластичные.

■ полиэтиленовая пленка.

■ ватно–марлевые подушечки.

■ лейкопластырь.

■ пинцеты.

■ бюксы на 20 мл.

■ фильтровальная бумага.

■ беззольные фильтры.

■ 0,07% раствор хлористоводородного пилокарпина.

■ 0,01 N раствор AgNO 3.

■ дважды перекристаллизованный NaCl.

■ 10% водный раствор хромата калия.

■ спирт 50°.

Кожа внутренней поверхности верхней трети предплечья последовательно очищается спиртом и водой. На обработанное место кладется смоченный 0,07% раствором пилокарпина кусок фильтровальной бумаги размером с прокладку. Сверху накладывается смоченная теплой водой прокладка и анод, которые покрываются полиэтиленовой пленкой и укрепляются эластичным бинтом. Катод аналогичным образом фиксируется на наружной поверхности плеча без обработки кожи.

Включается гальванический аппарат и сила тока постепенно доводится до 1,5–2 мА для малых электродов и 4–6 мА – для больших. Продолжительность процедуры не более 10 минут. Затем ток постепенно снижается до 0 и аппарат выключается. Электроды снимаются, покрасневший участок кожи под анодом промывается дистиллированной водой и высушивается. После этого на него накладывается листок предварительно взвешенного в бюксе беззольного фильтра размером 4 x 6 см, сверху покрывается полиэтиленовой пленкой, на 1 см выходящей за края бумаги. Пленка тщательно приклеивается к коже лейкопластырем, чтобы избежать испарения потовой жидкости. Сверху накладывается ватно–марлевая подушечка и укрепляется бинтом.

Продолжительность собирания пота – 30 минут. При плохом потоотделении время увеличивается до 60 минут. Затем пленка снимается, листок беззольного фильтра быстро переносится пинцетом (не руками!) в бюкс и вновь взвешивается. Разница в показателях второго и первого взвешивания соответствует количеству выделенного пота. С помощью этой методики можно получить до 500 мг пота. Навески менее 50 мг для анализа не берутся.

После взвешивания фильтровальная бумага заливается 10 мл дистиллированной воды и оставляется на 24 часа для элюирования электролитов. Если вес пота превышает 400 мг, то количество дистиллированной воды увеличивается до 20 мл и это учитывается при расчетах (окончательный результат удваивается).

■ Если результаты повторной потовой пробы сомнительны, но сохраняются веские клинические доказательства в пользу MB или выявляются отдельные симптомы, характерные для MB (например: стеаторея), рекомендуется проводить терапию, показанную больным с установленным диагнозом MB. В этих случаях следует периодически повторять потовый тест. Уточнению диагноза может способствовать генетическое тестирование (при условии его доступности).

■ Если не удается получить требуемое количество пота, рекомендуется стимулировать секрецию потовых желез с помощью теплового воздействия, кормления во время сбора пота или физических упражнений. Не следует также забывать о необходимости коррекции дегидратации, если таковая имела место незадолго до проведения потовой пробы. В области отека объем секрета потовых желез может быть сниженным. Повторная стимуляция в одной и той же области может привести к истощению потовых желез, что приводит к повышению концентрации электролитов.

■ Концентрации натрия и хлора в поте обычно примерно одинаковые. Поэтому различия в уровнях натрия и хлора, превышающие 10 ммоль/л, должны настораживать клинициста в отношении возможности технических погрешностей при проведении пробы.

■ У некоторых здоровых новорожденных в первые дни жизни могут отмечаться повышенные концентрации электролитов. Кроме того, сбор пота в этот период часто затруднен. Поэтому рекомендуется проводить потовую пробу не ранее первых 7 дней после рождения, некоторые специалисты предпочитают проводить тест детям старше месяца жизни, при возможности с проведением генетического обследования и определения хлоридов пота в динамике.

■ Несмотря на свою специфичность, метод по Гибсону–Куку является длительным, трудоемким и зависит от опыта проводящего персонала. В связи с этим, постоянно ведутся разработки аппаратов, которые позволили бы унифицировать методику, сократить время проведения теста и уменьшить количество пота, необходимое для постановки диагноза.

Система для сбора и анализа пота Макродакт в комплексе с потовым анализатором Sweat–Chek компании Wescor (США) позволяет провести потовую пробу вне лабораторных условий и успешно применяется у детей с первых месяцев жизни; время сбора пота составляет 30 мин.

Для обследования новорожденных применяется аппарат Нанодакт (фирма Wescor), объединяющий в себе систему для стимуляции потоотделения путем электрофореза 0,1% раствора пилокарпина и анализатор проводимости пота. Для теста необходимо минимальное количество потовой жидкости (всего 3–6 мкл) можно проводить обследование новорожденных, начиная с 3 дней жизни. Проводимость пота определяется совокупностью всех ионов, присутствующих в потовой жидкости (калий, натрий, хлор, бикарбонат, аммоний и др.), поэтому полученный результат превышает истинную концентрацию хлоридов примерно на 15–20 ммоль/л. Таким образом, положительными считаются результаты выше 80 ммоль/л, а показатели 60–80 ммоль/л рассматриваются как пограничные