Дмитрий Львов - Лихорадка Западного Нила

Конечно, для верификации диагнозе важна лабораторная диагностика. Сегодня широко применяются традиционные стандартные методы, направленные на деление вируса ЗН, обнаружение его антигенов или антител к нему. Материала для исследования служат объекты внешней среды (органы птиц, других носителей и суспензии переносчиков) и от человека – спинномозговая жидкость, сыворотка крови; из секционного материала – мозговые ткани, печень и селезёнка.

В настоящее время для поиска вируса наиболее эффективной является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Амплификация РНК позволяет в течение нескольких часов размножить нуклеотидную последовательность в количестве, превышающем исходное в 10 9раз, то есть обнажить единичные вирусы Такая высокая чувствительность и специфичность метода незаменима в период вирусемии и для контроля санации от возбудителя.

Поиск антигенов и антител к вирусу ЗН проводится с применением твердофазно–иммуноферментного анализа (ТИФА), энный метод по сравнению с другими иммуносорбционными методами наиболее результативен и позволяет выявлять антигены и антитела, а, кроме того, дифференцированно определяет lg различных классов, в том числе IgG и IgM.

Для обнаружения специфических антител обычно используют следующие методы исследования:

■ реакцию нейтрализации (РН).

■ реакцию связывания комплемента (РСК).

■ реакцию торможения гемагглютинации (РТГА).

Известно, что реакция нейтрализации (РН) является наиболее специфической их всех используемых серологических методов. В связи с этим ее применяют в ячестве подтверждающего теста при идентификации изолятов вируса. Однако в этом тесте выявляют перекрестно реагирующие антитела. Следовательно, нейтрализация вируса типовой сывороткой без количественного сравнения с гомологической системой недостаточна для идентификации вируса. Эта реакция ставится обычно на новорожденных мышах в качестве защитного теста, а также в культуре клеток с использованием метода бляшек.

Реакция связывания комплемента (РСК) может быть использована с целью определения антигенных групп вирусных изолятов. Эта реакция не всегда применяется как подтверждающий тест, так как между арбовирусами, относящимися к одной и той же антигенной группе, наблюдаются перекрестные реакции, число которых может быть снижено за счет использования специфических моноклональных антител.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) используется для определения вирусных штаммов по антигенным группам, однако она редко используется для специфической идентификации из–за выраженных перекрестных реакций между вирусами, относящимися к одной и той же антигенной группе. Она также широко используется при эпидемиологических обследованиях на вирусные инфекции, так как антигемагглютинины имеют относительно продолжительный срок жизни. Однако применение этих антител ограничено вирусами с гемагглютинирующей активностью.

Для тех вирусов, которые не гемагглютинируют в обычных условиях, может быть использована реакция пассивного торможения. Неспецифические ингибиторы и природные гемагглютинины, представляющие проблему при интерпретации полученных результатов, могут быть удалены путем обработки сывороток. Как и при любом серологическом исследовании, пробы крови берут не менее 2 раз (парные сыворотки): Первый – в острой стадии болезни, второй – через 10–14 дней. Пробы сывороток крови исследуют одномоментно. Для экстренной диагностики используется ТИФА, направленный на поиск IgM, которые появляются уже в начальной стадии заболевания и их можно определить уже на 4–5–й день болезни. Во второй сыворотке обнаруживают IgG. Ретроспективное исследование сывороток крови реконвалесцентов проводят с применением тест–систем для обнаружения IgG.

Таблица 5. Критерии диагностики ЛЗН.

В настоящее время все шире используются методы, которые еще недавно считались дополнительными и использовались крайне редко, например: